技術介紹
m6A是(shi)轉錄后調(diao)(diao)控中重要(yao)的(de)表(biao)觀遺傳修飾方式，該甲基(ji)化(hua)過程通過Writers（m6A甲基(ji)轉移酶(mei)）、Erasers（去(qu)甲基(ji)化(hua)酶(mei)）和(he)Readers（識別(bie)甲基(ji)化(hua)酶(mei)）的(de)調(diao)(diao)控作用在腺嘌呤A的(de)第(di)6位氮原子上，具有(you)影響基(ji)因表(biao)達、RNA剪(jian)接、RNA穩定和(he)蛋白翻譯等(deng)功能。
meRIP-Seq是目前分析m6A修飾(shi)(shi)分布的(de)(de)最常用測序技(ji)術，該方法將抗體(ti)依(yi)賴性(xing)m6A修飾(shi)(shi)區域富集(ji)與高(gao)(gao)通量測序相結合，可以(yi)高(gao)(gao)效地在全轉(zhuan)錄組(zu)范圍(wei)內檢測m6A的(de)(de)存在。
應用方向
1.構建全轉錄組m6A修飾圖譜；
2.識別(bie)m6A修飾富集區域及其(qi)關聯(lian)基因；
3.分析m6A修飾差異(yi)區域及其關聯(lian)基因；
4.與轉錄組、翻譯組、蛋(dan)白組等組學(xue)數(shu)據關(guan)聯分(fen)析，挖掘m6A影響基因功能的具(ju)體機制(zhi)。
技術優勢
1.樣品起始量低：
Total RNA起始量(liang)低(di)至20μg。
2.全轉錄(lu)組信息覆蓋(gai)：
獲得全轉錄組范圍m6A修飾富集區域(yu)及其關聯基(ji)因信息。
3.先進的(de)測序平臺：
采用DNBSEQ技術測(ce)序平臺(tai)，結果更可靠(kao)。
4.一站(zhan)式服務：
提供(gong)樣(yang)品處理、建庫、測序和分(fen)(fen)析的(de)全套服務(wu)，更可以提供(gong)多組(zu)學聯(lian)合分(fen)(fen)析。
技術流程
送樣建議
樣本來(lai)源(yuan)：人、大(da)鼠和小鼠（其(qi)他樣本類型(xing)請咨(zi)詢）。
1.新鮮或凍存組織樣(yang)本≥10mg；
2.新(xin)鮮或凍存細胞系樣本≥107cell；
3.RNA總量≥20μg，濃(nong)度≥200ng/μL。
實測數據
經典案例
圖 3 通(tong)過比較DNA甲(jia)基化、METTL3 TAP ChIP-Seq和meRIP-Seq數據，發現多個(ge)m6A富集基因(yin)的啟動子區內CpG島和METTL3富集區域(yu)一致，提示(shi)RNA的轉錄后修飾可能與其他的表觀遺傳調控機制存在關聯，也提示了meRIP-Seq數據與其他組學數據進行多組學分析的重要性
參考文(wen)獻：Xiao S, Cao S, Huang Q, et al. The RNA N6-methyladenosine modification landscape of human fetal tissues[J]. Nature cell biology, 2019, 21(5): 651-661.
本文利用m6A-meRIP-seq技術獲得了21個胎兒組織m6A分布圖譜，確定了m6A的組織間差異以及這種差異對組織特異性基因功能的影響，證明m6A與組織內關鍵基因穩定性正相關；
除了mRNA，本文還詳細報道了lincRNA中m6A分布特點，發現增強子lincRNA富含m6A修飾；組織上m6A修飾區域通常富含與常見疾病數量性狀和復雜性狀表達相關的SNP，這可能會影響m6A修飾；最后，發現m6A修飾優先占據富含CpG啟動子的基因。總之，本研究揭示了m6A過程受到遺傳變異和啟動子的廣泛調節，以及在人類發育和疾病中的廣泛參與而起到重要作用。
