Exosome作為(wei)活細胞分泌的含有(you)RNA和(he)蛋(dan)白質(zhi)的微囊(nang)，大小為30-100nm，廣泛分布于外周血(xue)、尿液、唾液、腹水、羊水等(deng)多種體液中。最新研究表明，體液中 exosomal RNA （特別是(shi)miRNA、piRNA和lncRNA等非(fei)編碼RNA）在不同的疾病模型中存在明顯的表達(da)差異。同時，這(zhe)些(xie)分子被exosomes的脂膜(mo)所包裹和(he)保護，能保持其(qi)原有穩定性和(he)生物(wu)(wu)學功(gong)能，有望成為(wei)液體活檢的重要分子標志物(wu)(wu)。
通(tong)過exosome lncRNA測序技術，可(ke)以開發針對復(fu)(fu)雜疾(ji)(ji)病的無創早期檢測標志(zhi)物(wu)；指導針對復(fu)(fu)雜疾(ji)(ji)病特(te)別是(shi)腫瘤(liu)的個性化治(zhi)療；用于疾(ji)(ji)病的預后判斷，特(te)別是(shi)循環系統疾(ji)(ji)病和腫瘤(liu)。
華銀采(cai)用全球領(ling)先的exosome RNA富(fu)集和提(ti)取技術(shu)，并結(jie)合微量(liang)RNA建庫和高通(tong)量測(ce)序(xu)技術，提供(gong)exosome lncRNA研究整(zheng)體解決方案，為廣大(da)的(de)生物醫學研究者提(ti)供最高質量的(de)技術服務。
1、實驗(yan)方案
測序(xu)策略：Illumina 平臺 PE150
數據(ju)量：12G clean data
2、技術優(you)勢
（1）更佳的提取(qu)方法(fa)：針對客(ke)戶樣本類型，提供不同(tong)的(de)提取(qu)方法（超離(li)法或試(shi)劑盒(he)法等(deng)），提高外泌體質量；
（2）更優質的改良：在提取外泌體之前(qian)，免費給客(ke)戶提供過膜處理的(de)選擇，可進(jin)一步增(zeng)加樣本(ben)純(chun)度（僅限細胞上清和其他體(ti)液）；
（3）更全的鑒(jian)定實驗：提供外泌(mi)體(ti)透射(she)電鏡觀測(ce)、粒(li)徑分析、表面標志蛋白檢測(ce)共三項鑒定服務(wu)，滿(man)足MISEV2018指南對(dui)胞外囊(nang)泡的鑒定要求；
（4）更領先的(de)建(jian)庫策略(lve)：采?獨有(you)的(de)微量(liang)建(jian)庫技(ji)術，極(ji)?提高建(jian)庫成(cheng)功率；
（5）更合適的(de)技術方案：針對不同的外泌(mi)體(ti)ncRNA(miRNA、lncRNA、circRNA)研究熱(re)點(dian)，量身打造最優(you)解決方案。
3、數據分析
3.1 標(biao)準信息分析(xi)
（1）數據過濾及質量評估
（2）核糖體RNA去除率計算(suan)
（3）比對參考基因組及統計
（4）基因(yin)表達水(shui)平分析
（5）基因表(biao)達差異及聚(ju)類(lei)分析
（6）差異基因KEGG生物通路富集分析（僅限(xian)于模式(shi)物種(zhong)）
（7）差異(yi)基(ji)因GO功能(neng)富(fu)集分析（僅限于模式物種）
（8）已知mRNA表達量分析(xi)
（9）已(yi)知mRNA差異表達(da)及聚類分析
（10）已知lncRNA表達量(liang)分析
（11）已知(zhi)lncRNA差異表達(da)及聚類分析
（12）預測新lncRNA
（13）新lncRNA鑒(jian)定(ding)和表(biao)達(da)量分析
（14）新lncRNA差異表達及聚類分析
（15）新lncRNA家族分析
（16）SNP和Indel檢測與注(zhu)釋
（17）生(sheng)物學重復樣品(pin)間相關性分析
（18）蛋白(bai)互作網(wang)絡分析
（19）基(ji)因融合(he)
（20）主(zhu)成份分析（PCA）
（21）特征性(xing)差異(yi)表達基因分析
（22）lncRNA保(bao)守性分析
（23）可變剪切
3.2 高級(ji)分析(xi)
（1）已知(zhi)mRNA-lncRNA共表達網(wang)絡構建
（2）基(ji)因(yin)結構優化及(ji)優化基(ji)因(yin)的表(biao)達值計(ji)算
（3）eQTL分析(xi)
4、技術流程
5、案例分(fen)析
案例（1）外泌體傳遞(di)lncARSR以提升(sheng)腎癌(ai)細胞的舒尼(ni)替尼(ni)抗(kang)藥性
舒尼替尼耐藥是(shi)晚期腎(shen)細胞癌（RCC）治(zhi)療的(de)(de)(de)一(yi)(yi)個難點。了解(jie)這一(yi)(yi)耐(nai)藥現象的(de)(de)(de)機制并(bing)制定(ding)(ding)抑(yi)制舒(shu)尼替尼耐(nai)藥的(de)(de)(de)有效(xiao)策略是目前臨床應(ying)用中面對的(de)(de)(de)重要問題(ti)。該(gai)研究確(que)定(ding)(ding)了一(yi)(yi)個與舒(shu)尼替尼抵(di)抗相關(guan)的(de)(de)(de)lncRNA（命名為lncARSR）。在RCC細胞中，lncARSR通過競(jing)爭性(xing)結合miR-34/miR-449來(lai)促進(jin)AXL和c-Met表達(da)而賦予細胞舒尼替(ti)尼抗性(xing)。此(ci)外(wai)，具(ju)有(you)生物活性(xing)的lncARSR可以被(bei)(bei)納(na)入外泌體并被(bei)(bei)傳輸到舒尼替尼敏感性RCC細胞，從而傳(chuan)播(bo)舒尼(ni)替尼(ni)抗(kang)性(xing)。對舒尼(ni)替尼(ni)抗(kang)藥(yao)性(xing)RCC施加舒尼(ni)替尼(ni)的(de)同時靶向關閉(bi)lncARAR或同時施加AXL/c-MET抑制劑可以有效緩(huan)解腫(zhong)瘤細胞對舒(shu)尼替尼抵抗。因此，lncARSR可用作(zuo)預測(ce)和治療(liao)舒尼替(ti)尼耐(nai)藥的潛在治療(liao)靶標。
圖(tu)1 lncARSR RCC舒尼替尼抗性通路的(de)作用機(ji)制
案例（2）前列腺外泌體中lncRNA富含miRNA種子(zi)序列
本(ben)研究中分(fen)析了(le)在幾組前列腺(xian)癌的外泌(mi)體(ti)和其(qi)親代細胞(bao)系的lncRNA表(biao)達(da)情況。研究發現，不同腫瘤細胞(bao)系來源外泌(mi)體(ti)均(jun)富含某些lncRNA。這些外泌體lncRNA本身(shen)富(fu)含(han)miRNA種子序列，包括let-7家族成(cheng)員以(yi)及miR-17，miR-18A，miR-20a，miR-93和miR-106b。并且在外泌(mi)體(ti)中同時(shi)伴隨高豐度相同種類的miRNA。此外，外泌體lncRNA也(ye)含有RNA結合(he)蛋白的結合(he)序列，最常見的兩種基序是ELAVL1和RBMX。鑒于外泌體(ti)lncRNA富含(han)miRNA種(zhong)子序列與RBP部位，其相互作用(yong)可(ke)能(neng)會(hui)在(zai)前列腺癌(ai)癌(ai)變過程中發揮重要功能(neng)。
圖(tu)1 前列(lie)腺細(xi)胞外(wai)泌體中lncRNA的數量和(he)表達差異
參考文獻(xian)
[1] Qu et al. Exosome-transmitted lncARSR promotes sunitinib resistance in renal cancer by act-ing as a competing endogenous RNA. Cancer Cell, 2016.
[2] Ahadi et al. Long non-coding RNAs harboring miRNA seed regions are enriched in prostate cancer exosomes. Scientific Reports, 2016.
